B.2.1 實驗材料
(1) 菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 6538株，大腸桿菌桿菌8099和白色念珠菌ATCC 10231株。參照《消毒技術規(guī)范》第三版第一分冊《實驗技術規(guī)范》第2.1.3.1和2.1.3.3條制備懸液。
(2) 載體：根據(jù)推薦消毒的對象，選擇合適的載體，可供選擇的載體有：玻璃片、不銹鋼片（或圈）、
塑料片、鋁片、布片等。載體大小一般為1.0cm?1.0cm。
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(3) 稀釋液和洗脫液：稀釋液采用磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L,pH7.2）；洗脫液用含中和劑的PBS。
(4) 生物學指示物：將一定量的指示菌株懸液污染在滅菌載體上，待干燥后，進行試驗。
(5) 采樣規(guī)格板：5. 0cm?5.0cm。
(6) 培養(yǎng)基:對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌,采用普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；對白色念珠菌，采用沙堡氏培養(yǎng)基。
B.2.2 實驗室評價
(1) 將染菌載體(生物學指示物)放于臭氧消毒柜內(nèi)，四角和中央各放一個，使其充分暴露。
(2) 關閉消毒柜。
(3) 開臭氧發(fā)生器，至柜內(nèi)臭氧濃度達到要求時開始計時。
(4) 設定四個作用時間，每到一個作用時間，取出生物指示劑一個，放入含10ml洗脫液和20粒玻璃珠的小三角燒瓶內(nèi)。
(5) 對洗脫液進行活菌計數(shù)：取其原液或適當稀釋液0.5ml，接種于無菌平皿，傾入融化并涼至45℃瓊脂培養(yǎng)基，搖勻，置恒溫箱培養(yǎng)48小時。
(6) 對照樣片除不暴露于臭氧外，其他處理方法同消毒組樣片，對照組生物指示物為與消毒組同批的生物指示物，在同樣溫濕度下放致最長消毒時間后才開始洗菌。
    (7) 本試驗重復三次，取其平均殺菌率。
（8） 結果分析
①殺菌率的計算
可用下述公式計算殺滅率：
 
②結論：每個位置生物指示物的平均殺滅率均達到≥99.9%，則可判定為消毒合格。
B.2.3 模擬現(xiàn)場試驗
      (1)人工染菌實物為消毒試驗對象，可選擇油漆木板表面，陶磁磚表面，搪磁用具表面，陶磁用具表面等。
（2）染菌：取消毒試驗對象5塊進行滅菌處理，用沾有菌液的棉簽對畫出的試驗區(qū)染菌（來回涂布，至菌液布滿），在無菌環(huán)境中干燥后，進行試驗。務使染菌量達到5×105～5×106/cm2。
（3）將染菌試驗對象放臭氧消毒箱（或消毒柜）內(nèi)最難達到消毒的部位，開啟臭氧消毒器，作用至預定時間時，取出消毒試驗對象，用沾有含中和劑的PBS棉簽，用擦拭法（每區(qū)橫豎往返各8次）采樣。剪掉采樣棉簽頭部棉花，使落入含5ml采樣液的試管中，振打80次或放電動振蕩器上振1分鐘，吸取其原液或稀釋液接種平皿，進行活菌計數(shù)。
（4）對照組采用同樣方法采樣、洗菌和培養(yǎng)，進行活菌計數(shù)，采樣時間應與消毒組最后一個樣本同時進行。
（5）結果分析：
殺滅率可用下述公式計算

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結果判定：各次殺滅率和平均殺滅率均≥99.9％的作用時間，為最低作用時間。
本試驗應重復三次。試驗溫度為20±2℃，相對濕度為70～80％。試驗菌液中應加有50％血清。
B.2.4 現(xiàn)場試驗
按照實際使用條件，以自然菌為試驗微生物，以實際消毒物品為試驗對象進行試驗，檢測樣本數(shù)應≥30份。
（1）隨機抽取消毒物品，用5×5cm2規(guī)格板選定對照區(qū)用沾有含中和劑的PBS棉簽擦拭采樣（橫豎各8次），將棉簽頭剪入采樣液試管內(nèi)（含采樣液5ml），振打80次或電動振蕩1分鐘。取其原液或稀釋液，接種平皿，進行活菌計數(shù)，為對照組。
（2）將選定的消毒對象放入臭氧消毒箱內(nèi)消毒至預定時間取出，用和對照組同樣方法采樣，洗菌，接種，培養(yǎng)，為試驗組。
（3）結果分析
可用下述公式計算殺滅率：
 
結果判定：以每件樣品消毒后的殺滅率均達到≥90％的作用時間，為合格消毒時間。
（4）注意事項：參照《消毒技術規(guī)范》第三版，第一分冊5.4.7執(zhí)行。